關于真菌的培養技術

玻片培養又稱小培養，小培養法可以隨時觀察真菌的生長形態（如大分生孢子、小分生孢子及孢子柄等），還可以隨時觀察其生長發育的全部情況，有利于菌種的鑒定。

1、鋼環法

（1）材料：白假絲酵母菌、沙保弱培養基、無菌玻片、蓋玻片、鋼環（帶有缺 口）、石蠟。

（2）方法

①用無菌鑷子取無菌小培養鋼環，環的兩面分別蘸取熔化的固體石蠟，平置于無菌載玻片上，另取一無菌蓋玻片，在酒精燈火焰上加熱后覆蓋于鋼環上，待冷后，小培養鋼圈即被固定于載玻片與蓋玻片之間。

②用毛細滴管吸取融化的培養基，從鋼環上端孔注入，注入量占容積的1/2即可。

③培養基冷卻凝固后，用接種針挑取材料，由上端孔接種于環內培養基上。

④置濕盒內，室溫或37℃下培養2—3d后，逐日觀察，鏡下可連續看到真菌生長過程及菌絲、孢子等特征，一般7d左右即可長好。

⑤也可不用小培養鋼環，直接將融化的培養基滴于無菌玻片上，待冷凝后從周邊接種材料，用蓋玻片覆蓋后培養，在顯微鏡下連續觀察生長情況。

（3）結果：鏡下觀察可見到有胞壁增厚的厚膜孢子及假菌絲。

2、小塊瓊脂玻片培養法
   用無菌操作法將制好的待用瓊脂平板用無菌接種針或接種環切成大約1cm2的方塊，將其放置于滅菌的載玻片上。將標本或待檢菌接種于瓊脂塊四周邊緣靠上方部位，然后用無菌鑷子取一無菌的蓋玻片蓋在瓊脂上。在無菌平皿內放入少量無菌水和一個無菌U形（或V形）玻璃棒。將此載玻片置于玻璃棒上，蓋上平皿蓋培養。每日用肉眼和顯微鏡觀察孢子和菌絲的特點。