ELISA試劑盒SCI文章在操作過程中總是會出現或大或小的問題，比如說花板、假陽性、全顯色、信號值比空白還低等等。

 下面就由我拋磚引玉地來說一下，做ELISA試劑盒的經驗總結：

1、包被原的性質很重要，蛋白濃度，是否降解，這關系到你做出的抗體可不可以被其識別，所以保存抗原很重要，我做重組蛋白時，師兄都嚴格警告我一定要在冰浴下緩慢融化就是這個道理。還有有的包被原可能不是蛋白，對于生物素和脂類物質或小分子物質我們要事先對其改造再加以包被，我把方法簡要的列出如下：①親和素生物素：先親和素先包被載體，加入生物素化的DNA，這種包被方法均勻、牢固，已擴大應用于。②脂類物質：可將其在有機溶劑（例如乙醇）中溶解后加入ELISA板孔中，開蓋置冰箱過夜或冷風吹干，待酒精揮發后，讓脂質自然干固在固相表面。③小分子必須依靠和大的蛋白載體偶聯后才能固定在固相載體上。

2、包被液的選擇，一般選擇ph9.6的碳酸鹽緩沖液。但有時由于試驗的需要，包被原的特殊性也可能采用中性的緩沖溶液來包。應注意以下原理：ELISA試劑盒由于蛋白質與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附結合的，靠的是蛋白質分子結構上的疏水基團與固相載體表面的疏水基團間的作用，這種物理吸附是非特異性的，受蛋白質的分子量、等電點、濃度等的影響，大分子蛋白質較小分子蛋白質通常含有更多的疏水基團，故更易吸附到固相載體表面。具體的試驗還要有堅固的理論外也要實踐，看一下zui終可不可以應用到自己試驗當中去。常用的包被液除了剛才提到的pH9.6碳酸鹽緩沖液，還有pH7.2的磷酸鹽緩沖液和pH7-8的Tris-HCL緩沖液等等。

3、封閉：繼包被之后用高濃度的無關蛋白質溶液再包被的過程。封閉就是讓大量不相關的蛋白質充填這些空隙，從而排斥ELISA試劑盒SCI文章后的步驟中干擾物質的再吸附。常用封閉劑有：0.05%-0.5%的BSA；10%的小牛血清或1%明膠；脫脂奶粉，比較價廉，可以高濃度使用（5%－10％）；還有一些稀有用到的各種動物血清 （主要為了排除相似蛋白干擾）和酪蛋白等等。但zui終選用什么，要依據試驗具體來實踐。

 peripherin 酪氨酸蛋白激酶受體B6抗體

 PERK 酪氨酸蛋白激酶Fyn（同步原癌基因）抗體

 Persephin 酪氨酸蛋白激酶A4受體抗體

 Pescadillo 酪氨酸蛋白激酶A4抗體

 PFK2/PFKFB3 賴氨酸缺陷型蛋白激酶1抗體

 PFKFB1 辣椒素受體抗體

 PFKFB2 辣根過氧化物酶標記聚組氨酸抗體標簽抗體IgG

 PFKL/Fructose 6 Phosphate Kinase 醌氧化還原酶抗體

 PGAM1/PGAM2 跨膜受體蛋白Notch-3抗體

 PG-C 跨膜受體蛋白Notch-2抗體

 PGE2 跨膜受體蛋白Notch-1抗體
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