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        超氧化物歧化酶(SOD)測試盒(WST8法)

        簡要描述:

        超氧化物歧化酶(SOD)測試盒(WST8法)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,催化超氧化物陰離子發生岐化作用,生成H2O2和O2。SOD不僅是超氧化物陰離子清除酶,也是H2O2主要生成酶,在生物抗氧化系統中具有重要作用。

        更新時間:2024-09-02;廠商性質:經銷商;覽量:2197

        超氧化物歧化酶(SOD)測試盒(WST8法)

        商品詳情:
        測定意義:

         SOD(EC 1.15.1.1)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,催化超氧化物陰離子發生岐化作用,生成H2O2和O2。SOD不僅是超氧化物陰離子清除酶,也是H2O2主要生成酶,在生物抗氧化系統中具有重要作用。

        貨號

        規格

        檢測方法

        YSH3271

        100管/96樣

        微量法

        YSH3271-1



        測定原理:

        通過氧化酶反應系統產生超氧陰離子(O2-),O2-可與WST-8反應產生水溶性染料甲臜,后者在450nm處有吸收;SOD可清除O2-,從而抑制了甲臜的形成;反應液黃色越深,說明SOD活性愈低,反之活性越高。

        需自備的儀器和用品:

        酶標儀、離心機、移液器、96孔板、研缽、冰和蒸餾水
        樣品中AA提取:

        1.按照組織質量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進行室溫勻漿,然后轉移到1.5 mL EP 管中,蓋緊后(防止水分散失)置于沸水浴提取15 min;自來水冷卻后,8000g,,4℃離心10min,上清液置冰上待測。

        2.細菌或培養細胞:先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照細菌或細胞數量(104個):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細菌或細胞加入1mL試劑一),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復30次);8000g,4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

        3.血清等液體:直接檢測。

        計算公式如下:

        1、血清(漿)LAP活力的計算:

        單位的定義:每mL血清(漿)每分鐘生成1 nmol的對硝基苯胺定義為一個酶活力單位。

        LAP(nmol/min/mL)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷V樣÷T=205.8×ΔA

        2、組織、細菌或細胞中LAP活力的計算:

        1)按樣本蛋白濃度計算:

        單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol 對硝基苯胺定義為一個酶活力單位。

        LAP(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=205.8×ΔA÷Cpr

        2)按樣本鮮重計算:

        單位的定義:每g組織每分鐘生成1 nmol 對硝基苯胺定義為一個酶活力單位。

        LAP(nmol/min /g 鮮重)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T=205.8×ΔA÷W

        3)按細菌或細胞密度計算:

        單位的定義:每1萬個細菌或細胞每分鐘生成1 nmol 對硝基苯胺定義為一個酶活力單位。

        LAP(nmol/min /104 cell)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(2000×V樣÷V樣總) ÷T=0.103×ΔA

        V反總:反應體系總體積,2×10-4 L;ε:對硝基苯胺摩爾消光系數,9.72×103 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V樣:加入樣本體積,0.05 mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應時間,2 min;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本質量,g;2000:細菌或細胞總數,2000萬。

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        注意事項:

        1. 試劑盒中試劑三、試劑四和標準品均需臨用前配制,且避光保存,配制好未使用完的4℃保存且3天內使用完畢。

        2. 為保證實驗結果的準確性,需先取1-2個樣做預實驗,如果測定的吸光值過高(高于2.5),用蒸餾水稀釋后再測定。

        3. 與茚三酮反應在570nm處無吸收峰,因此,570nm處測定結果不含這兩種氨基酸的量。

        4.檢出限為100μmol/L。


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